GnRH-PEⅡ-luffinS重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测 |
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作者姓名: | 刘艳华 高姗 康琳 王俊红 赵金银 高艳丽 胡瑞 王景林 |
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作者单位: | 军事医学科学院微生物流行病研究所 军事医学科学院微生物流行病研究所 军事医学科学院微生物流行病研究所 武警医学院预防医学系 军事医学科学院微生物流行病研究所 军事医学科学院微生物流行病研究所 西北农林科技大学动物医学院 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 |
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摘 要: | 目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa、A549、HepG-2、SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用。结果:成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94%。GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa、A549、HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml、13.74μg/ml、16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用。结论:重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。
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关 键 词: | GnRH I PEⅡ luffinS2 重组嵌合毒素 细胞毒性 |
收稿时间: | 2008-03-28 |
修稿时间: | 2008-05-12 |
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