| 鰤鱼诺卡氏菌SOD基因克隆与表达及其酶活性质测定 |
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| 引用本文： | 侯素莹,黄嘉慧,陈建林,王文基,鲁义善,夏立群.鰤鱼诺卡氏菌SOD基因克隆与表达及其酶活性质测定[J].基因组学与应用生物学,2019,38(11):4894-4901. |
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| 作者姓名： | 侯素莹 黄嘉慧 陈建林 王文基 鲁义善 夏立群 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学深圳研究院,深圳,518108;广东海洋大学水产学院,湛江,524088;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,湛江,524088;广东海洋大学深圳研究院,深圳,518108;广东海洋大学水产学院,湛江,524088;广东省水生动物健康评估工程技术研究中心,深圳,518108;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,湛江,524088;广东海洋大学深圳研究院,深圳,518108;广东海洋大学水产学院,湛江,524088;广东省水生动物健康评估工程技术研究中心,深圳,518108 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金;深圳市科技计划;深圳大鹏新区产业发展专项;广东海洋大学自然科学研究项目;广东海洋大学自然科学研究项目;广东省科技发展专项资金项目;广东省大学生创新创业训练计划 |
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| 摘 要： | 鱼类的诺卡氏菌病主要由鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)引起。为探讨鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子及其感染致病机制,本研究通过对鰤鱼诺卡氏菌全基因组序列的分析,发现了一个编码超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的基因。生物信息学分析显示该基因编码一个分泌蛋白,可能是鰤鱼诺卡氏菌潜在的毒力因子。本研究通过基因克隆获取了鰤鱼诺卡氏菌SOD基因(NsSOD),其长度为624 bp。利用双酶切技术在含有GST标签的原核表达载体pGEX-6P-1中插入NsOD基因片段,成功构建了其重组表达载体并命名为pGEX-SOD。将pGEX-SOD导入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得了原核表达菌株BL21/pGEXSOD并对其诱导表达条件进行了摸索,确定25℃、IPTG(1 mmol/L)诱导14 h,可成功获得具有生物活性的可溶性NsSOD重组蛋白。随后利用GST标签亲和柱纯化NsSOD重组蛋白,并进行酶活性质测定,确定NsSOD重组蛋白的活性为2.76酶活力单位。通过对NsSOD进行基因克隆、原核表达、重组蛋白纯化及体外酶活性质测定,为进一步研究NsSOD的功能和深入了解鰤鱼诺卡氏菌的致病机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鰤鱼诺卡氏菌 超氧化物歧化酶 原核表达 蛋白纯化 酶活性质测定 |
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