| 带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定 |
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| 引用本文： | 赵向忠,刘明,丁丽丽,吴宁,林秀坤.带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定[J].生物技术通报,2010(8). |
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| 作者姓名： | 赵向忠 刘明 丁丽丽 吴宁 林秀坤 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院海洋研究所,青岛,266071;中国科学院研究生院,北京,100039
2. 中国科学院海洋研究所,青岛,266071 |
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| 基金项目： | 中科院知识创新工程项目 |
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| 摘 要： | 构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting检测基因表达情况。结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带。斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达。
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| 关 键 词： | p53基因 斑马鱼 真核表达 HeLa细胞 |
Construction and Expressional Analysis of Eukaryotic Expression Vector for His-tagged Zebrafish p53 Protein |
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| Zhao Xiangzhong,Liu Ming,Ding Lili,Wu Ning,Lin Xiukun.Construction and Expressional Analysis of Eukaryotic Expression Vector for His-tagged Zebrafish p53 Protein[J].Biotechnology Bulletin,2010(8). |
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| Authors: | Zhao Xiangzhong Liu Ming Ding Lili Wu Ning Lin Xiukun |
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| Abstract: | |
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