α-Synuclein与14-3-3蛋白在体外分子间相互作用的鉴定 |
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作者姓名: | 黄银霞 韩俊 韩露 董辰方 高晨 王小凡 周伟 董小平 |
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作者单位: | 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,100052 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;国家科技攻关计划;欧盟资助项目 |
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摘 要: | 帕金森病(Parkinson’s disease, PD)涉及两种蛋白——α-synuclein蛋白(SNCP)与14-3-3蛋白.通过重组,将这两种蛋白在大肠杆菌DH5α中表达, 通过谷胱甘肽- Sepharose 4B亲和层析将其纯化,得到GST-14-3-3蛋白;利用凝血酶对纯化的融合蛋白GST-SNCP切割,再经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析获得SNCP.通过免疫共沉淀、GST pull down和ELISA等技术,证明SNCP能够与14-3-3蛋白结合;为了进一步证明SNCP也与在脑组织中的天然14-3-3蛋白发生作用,利用His pull down方法进行实验.结果证明,SNCP能够和脑组织中的14-3-3蛋白发生相互作用.这些结果从分子水平提供了SNCP与14-3-3蛋白相互作用的实验证据,为进一步了解SNCP的结构和功能,及其在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.
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关 键 词: | 退行性疾病 免疫共沉淀 pulldown 蛋白相互作用 α-synuclein 14-3-3蛋白 |
收稿时间: | 2006-11-10 |
修稿时间: | 2006-11-10 |
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