绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因在大肠杆菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究 |
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作者姓名: | 黄艳燕, 左文朴, 秦国梅, 韦宇拓, 杜丽琴, 庞宗文, 黄日波 |
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作者单位: | [1]广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530004; [2]广西科学院,广西南宁530006 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(20666002),广西科技攻关项目(桂科攻0537012)联合资助. |
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摘 要: | 将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3)。利用金属亲和层析对重组EGⅢ进行纯化,纯化后酶比活力达到6u/mg蛋白,最适反应温度为60℃,最适pH为4.0。同时对EGⅢ催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变,各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F,其比活力为野生型EGⅢ的2.8倍和3.45倍。突变酶E218F的Km提高了一倍,催化效率Kcat提高了5.4倍;而R130P的Km和Kcat没有明显变化。两个突变酶的最适酶解温度和pH分别都提高至65℃和4.4。
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关 键 词: | 绿色木霉 葡聚糖内切酶Ⅲ 大肠杆菌 定点饱和突变 |
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