| VD_3羟化酶及其电子传递链的体外构建及活性研究 |
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| 引用本文： | 柯霞,丁冠军,孙骏,王露,郑裕国.VD_3羟化酶及其电子传递链的体外构建及活性研究[J].中国生物工程杂志,2016,36(5):89-96. |
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| 作者姓名： | 柯霞 丁冠军 孙骏 王露 郑裕国 |
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| 作者单位： | 浙江省生物有机合成技术研究重点实验室 浙江工业大学生物工程学院 杭州 310014 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31400978),浙江省教育厅科研项目(Y201329109)资助项目 |
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| 摘 要： | 活性维生素D_3具有广泛生理活性及药用价值,利用分子操作技术,在大肠杆菌细胞中重组表达VD_3羟化过程的关键酶体系,是实现活性维生素D_3生物法合成的有效手段。构建了来源于自养无枝酸菌(Pseudonocardia autotrophica)VD_3羟化酶(Vdh,EC 1.14.13.159)及来源于不动杆菌(Acinetobacter sp.OC4)的铁氧还蛋白Fdx及铁氧还蛋白还原酶FdR的重组表达载体p ET28b-Vdh、p ET28b-FdR-Fdx,以大肠杆菌为宿主细胞,体外诱导表达并通过镍柱纯化三种蛋白质,通过CO差光谱法评价羟化酶Vdh体外活性,并利用2,6-二氯靛酚钠(DCIP)和细胞色素c作为电子受体评价电子传递链FdR-Fdx对NADH和NADPH的氧化活性及与羟化酶Vdh的偶联作用,最后利用Vdh及其电子传递链催化维生素D_3的选择性羟化合成25(OH)VD_3。
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| 关 键 词： | 电子传递链 维生素D3羟化酶 生物催化 |
| 收稿时间： | 2015-12-28 |
Vitamin D3 Hydroxylase and Its Electronic Transfer Chain in vitro Construction and Activity Analysis |
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| KE Xia,DING Guan-jun,SUN Jun,Wang Lu,ZHENG Yu-guo.Vitamin D3 Hydroxylase and Its Electronic Transfer Chain in vitro Construction and Activity Analysis[J].China Biotechnology,2016,36(5):89-96. |
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| Authors: | KE Xia DING Guan-jun SUN Jun Wang Lu ZHENG Yu-guo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vitamin D3 hydroxylase Biocatalysis Electron transfer chain |
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