| 技术与方法体外组装含有组蛋白变体H2A.Z及H3.3的核小体 |
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| 引用本文： | 赵宏宇,刘媛,张凤慧,邢永强,蔡禄. 技术与方法体外组装含有组蛋白变体H2A.Z及H3.3的核小体[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(3): 53-60. DOI: DOI:10.13523/j.cb.20160308 |
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| 作者姓名： | 赵宏宇 刘媛 张凤慧 邢永强 蔡禄 |
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| 作者单位： | 1. 内蒙古大学物理科学与技术学院 呼和浩特 010021;2. 内蒙古科技大学数理与生物工程学院 包头 014010 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(61271448),内蒙古自然科学基金(2013MS0514,2014MS0312)资助项目 |
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| 摘 要： | 核小体是构成真核生物染色质的基本结构单位,组蛋白变体H2A.Z及H3.3对染色质结构及基因转录过程发挥着重要的调控作用。体内研究核小体及染色质结构受到诸多因素限制,体外重构含有H2A.Z及H3.3的核小体结构是研究与组蛋白变体相关基因表达调控的重要方法之一。实验表达纯化了6种组蛋白,在复性的过程中装配了含有H2A.Z和H3.3的组蛋白八聚体。基于DNA序列10bp周期性及序列模体设计了3条易于形成核小体的DNA序列,通过PCR大量扩增的方法,回收了标记Cy3荧光分子的目的DNA序列。采用盐透析法体外组装了含有H2A.Z和H3.3的核小体结构,利用荧光标记、EB染色及考马斯亮蓝染色检测了含有组蛋白变体的核小体形成效率及形成过程的吉布斯自由能变化。结果发现,设计的3条DNA序列可以有效地组装形成含有组蛋白电梯的核小体结构,而且随着组蛋白八聚体与DNA比例的增加,核小体的形成效率显著提高;采用Cy3荧光标记可以灵敏且定量地计算组装过程的吉布斯自由能。该方法的建立对研究组蛋白变体相关的结构生物学及转录调控等具有一定的意义。
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| 关 键 词： | 核小体定位 组蛋白变体 荧光标记 染色质结构 |
| 收稿时间： | 2015-10-14 |
Assembly Nucleosome Containing Histone Variant H2A.Z and H3.3 in vitro |
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| ZHAO Hong-yu,LIU Yuan,ZHANG Feng-hui,XING Yong-qiang,CAI Lu. Assembly Nucleosome Containing Histone Variant H2A.Z and H3.3 in vitro[J]. China Biotechnology, 2016, 36(3): 53-60. DOI: DOI:10.13523/j.cb.20160308 |
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| Authors: | ZHAO Hong-yu LIU Yuan ZHANG Feng-hui XING Yong-qiang CAI Lu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Chromatin structure Histone variant Nucleosome positioning Cy3 labeling |
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