| 构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因缺失菌株实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰 |
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| 引用本文： | 杜红燕,李天明,刘金雷,冯惠勇. 构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因缺失菌株实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(7): 64-71. DOI: 10.13523/j.cb.20160710 |
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| 作者姓名： | 杜红燕 李天明 刘金雷 冯惠勇 |
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| 作者单位： | 河北科技大学生物科学与工程学院 石家庄 050018 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划资助项目（2015BAD15B0501） |
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| 摘 要： | 弱氧化葡糖酸杆菌(Gluconobacter suboxydans)可高效不完全氧化多种糖类和醇类等多羟基化合物,生成相应的醛类、酮类和有机酸类等产物,是一类重要的工业微生物。利用同源重组技术对基因组进行修饰改造是工业育种的有效手段。传统方法多选用抗生素为筛选标记,存在诸多缺陷。构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因缺失菌株以实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰为目标,将自杀质粒p MD18-Jqupp电转化至野生型Gluconobacter suboxydans J12中,通过四环素抗性和5-氟尿嘧啶双重筛选,获得敲除了编码尿嘧啶磷酸核糖转移酶的基因upp的突变株。经生理验证表明,该突变株在含0.5mg/ml 5-氟尿嘧啶的培养基上生长,而回补upp基因后,在0.5mg/ml 5-F氟尿嘧啶的培养基上不生长。说明获得的G.suboxydans-upp突变株能以upp基因作为负向筛选标记,通过两次同源重组,实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰与改造,为今后代谢工程改造Gluconobacter suboxydans获得有价值的工业菌种奠定基础。
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| 关 键 词： | 尿嘧啶磷酸核糖转移酶 基因敲除 无痕修饰 弱氧化葡糖酸杆菌 |
| 收稿时间： | 2016-01-18 |
Construct the Uracil Phosphoribosyl Transferase Gene Mutant Strain in Gluconobacter suboxydans for Seamless Genome Editing |
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| DU Hong-yan,LI Tian-ming,LIU Jin-lei,FENG Hui-yong. Construct the Uracil Phosphoribosyl Transferase Gene Mutant Strain in Gluconobacter suboxydans for Seamless Genome Editing[J]. China Biotechnology, 2016, 36(7): 64-71. DOI: 10.13523/j.cb.20160710 |
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| Authors: | DU Hong-yan LI Tian-ming LIU Jin-lei FENG Hui-yong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gluconobacter suboxydans Gene knockout Scarless modify Uracil phosphoribosyl transferase |
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