Myocardin调控心肌H9C2细胞Ca2+通道机制研究

目的：研究同样在维持心脏正常结构和功能过程中发挥着重要作用的转录因子心肌素Myocardin对L型Ca²⁺通道Cav1.2的转录调控作用及分子机制。方法：全细胞膜片钳技术记录心肌细胞膜Ca²⁺电流，慢病毒包装技术制备Myocardin-GFP慢病毒用于感染心肌细胞以过表达Myocardin，Real-time PCR定量检测Cav1.2基因mRNA水平，Western blotting检测Cav1.2蛋白表达水平。PCR介导的定点突变技术得到Ca²⁺通道启动子区特定CarGbox位点突变的突变体。荧光素酶报告系统检测野生型WT和突变体MU启动子活性，以确定Myocardin在Cav1.2基因启动子区的作用位点。结果：全细胞膜片钳技术表明Myocardin激活Cav1.2而增加心肌细胞膜Ca²⁺电流，real-time PCR和Western blotting结果表明，Myocardin激活Cav1.2基因的转录和表达，荧光素酶报告系统检测突变体启动子活性，发现Myocardin激活Cav1.2基因的转录依赖其启动子区的CarGbox。结论：Myocardin通过与Cav1.2基因启动子区CarGbox结合进而激活其转录和表达，促进Ca²⁺通道蛋白装配到心肌细胞膜上，加强Ca²⁺内流，增强膜电流。