| 家蝇C-型凝集素的克隆与功能分析 |
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| 引用本文： | 邢建晓,刘艳娟,路永鹏,唐婷,柳峰松.家蝇C-型凝集素的克隆与功能分析[J].昆虫学报,2016(1):16-24. |
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| 作者姓名： | 邢建晓 刘艳娟 路永鹏 唐婷 柳峰松 |
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| 作者单位： | 河北大学生命科学学院,河北保定,071002 |
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| 基金项目： | 河北省自然科学基金，河北省教育厅项目，河北大学自然科学基金 |
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| 摘 要： | 【目的】从家蝇Musca domestica中克隆一种C-型凝集素(C-type lectin)基因,并分析其在家蝇免疫过程中的功能。【方法】根据家蝇转录组信息,克隆了一条C型凝集素基因,将其命名为Mdlectin-C1。构建Mdlectin-C1的原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中表达并纯化r Mdlectin-C1蛋白,制备多克隆抗体。利用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及Western blot技术对家蝇不同发育阶段和细菌感染前后Mdlectin-C1的表达水平进行检测。运用RNAi技术敲低家蝇1龄幼虫Mdlectin-C1基因表达,然后进行细菌刺激并观察幼虫存活率变化。【结果】Mdlectin-C1 c DNA包含一个546 bp完整开放阅读框,编码181个氨基酸残基,所推导多肽N端包含由21个氨基酸残基组成的信号肽,成熟肽中含有一个保守的碳水化合物识别结构域(carbohydrate-recognition domain,CRD)。qRT-PCR及Western blot结果显示,家蝇从1龄幼虫到蛹的发育过程中,Mdlectin-C1表达量逐步上升,蛹期达到最大值。在革兰氏阴性菌大肠杆菌E.coli和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus刺激后,家蝇2龄幼虫Mdlectin-C1均上调表达,并分别在36和3 h时达到最高值。利用RNAi技术成功敲低Mdlectin-C1表达。对Mdlectin-C1基因敲低的1龄幼虫进行细菌刺激,敲低实验组幼虫存活率显著低于正常对照组。【结论】Mdlectin-C1可能参与家蝇抗菌免疫应答,并在此过程中具有重要作用。
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| 关 键 词： | 家蝇 C-型凝集素 RNAi 细菌刺激 先天免疫 模式识别受体 |
Cloning and functional analysis of C-type lectin from Musca domestica (Diptera: Muscidae) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Musca domestica C-type lectin RNAi bacterial challenge innate immune pattern recognition receptor |
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