| 汉坦病毒S基因的克隆及体外转录 |
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| 引用本文： | 郝丽娜,胡丹,吕恒,张锦海,张凤玉,龚秀芳,李丙军,朱进,潘秀珍,姚苹苹,张云,王长军,陈建华. 汉坦病毒S基因的克隆及体外转录[J]. 生物技术通讯, 2014, 0(2): 179-182 |
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| 作者姓名： | 郝丽娜 胡丹 吕恒 张锦海 张凤玉 龚秀芳 李丙军 朱进 潘秀珍 姚苹苹 张云 王长军 陈建华 |
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| 作者单位： | [1]中国药科大学,江苏南京210009 [2]南京军区军事医学研究所,江苏南京210002 [3]浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州310051 |
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| 基金项目： | 国家重大传染病防治专项（2013zx10004-103;2013ZX10004-104;2013ZX10004-203;2013ZX10004-218;2012ZX10004801-004）;国家自然科学基金（81171609）;全军后勤科研“十二五”重大项目（AWS11C001;AWS11C009）;南京军区医学科技课题（12MA119;102039;112040）;江苏省科技支撑计划（社会发展）（BE2013603;BE2012609） |
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| 摘 要： | 目的:通过基因克隆和体外转录,获得汉坦病毒汉滩型76118株及汉城型R22株S基因的RNA全长cRNA,为汉坦病毒病原学检测提供阳性定量标准品。方法:设计汉滩型76118株和汉城型R22株S基因克隆引物,PCR获得相应片段,分别克隆至含双启动子的PCRⅡ载体中,测序鉴定无误后,重组质粒分别经内切酶SpeⅠ、SacⅠ线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物经DNase处理、纯化后测定浓度,经RT-PCR验证。结果:获得汉滩型76118株及汉城型R22株S基因的cRNA片段,并可准确定量其拷贝数,76118株和R22株的质量浓度分别为80、17.58 ng/μL。结论:获得的cRNA样品可作为汉坦病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。
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| 关 键 词： | 汉坦病毒 克隆 体外转录 |
Cloning and RNA Transcription in Vitro of S Gene of Hantavirus |
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| HAO Li-Na,HU Dan,LYU Heng,ZHANG Jin-Hai,ZHANG Feng-Yu,GONG Xiu-Fang,LI Bing-Jun,ZHU Jin,PAN Xiu-Zhen,YAO Ping-Ping,ZHANG Yun,WANG Chang-Jun,CHEN Jtan-Hua,. China Parmaceutical University,Nanjing,;. Cloning and RNA Transcription in Vitro of S Gene of Hantavirus[J]. Letters in Biotechnology, 2014, 0(2): 179-182 |
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| Authors: | HAO Li-Na,HU Dan,LYU Heng,ZHANG Jin-Hai,ZHANG Feng-Yu,GONG Xiu-Fang,LI Bing-Jun,ZHU Jin,PAN Xiu-Zhen,YAO Ping-Ping,ZHANG Yun,WANG Chang-Jun,CHEN Jtan-Hua,. China Parmaceutical University,Nanjing, |
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| Affiliation: | , E-mail： chenjhnj@163.com; WANG Chang-Jun, E-mail： science2008@hotmail.com) |
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| Abstract: | |
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