A组轮状病毒我国地方株VP6基因的序列测定及其在杆状病毒系统中的表达

通过反转录－ 聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ） 获得了轮状病毒地方株 Ｔ１１４ Ｖ Ｐ６ 全基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段，将其克隆入转移载体质粒ｐ Ｖ Ｌ１３９３ 中，构建成重组质粒ｐ Ｖ Ｌ１３９３ － Ｖ Ｐ６ 。对克隆的 Ｖ Ｐ６ 基因进行序列测定，并用它和杆状病毒（ Ａｃ Ｍ Ｎ Ｐ Ｖ） 野毒株 Ｄ Ｎ Ａ 共转染 Ｓｆ９ 细胞，筛选纯化得到含 Ｖ Ｐ６ 基因插入片段的重组杆状病毒，并进行了表达重组蛋白 Ｖ Ｐ６ 的检测。测序结果显示 Ｖ Ｐ６ 基因全长１ ３５６ｂｐ ，序列分析显示与 Ｗａ 株非常接近，提示 Ｔ１１４ 为亚组Ⅱ病毒株。用高价免疫血清经 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测表达产物，结果显示，重组病毒感染细胞裂解液样品中可见大小约４５ｋ Ｄ 的特异条带；亚组Ⅱ特异性单抗检测到大小约１２０ｋ Ｄ 的条带，提示重组蛋白 Ｖ Ｐ６ 获得了表达，具有正常的抗原反应性和天然 Ｖ Ｐ６ 的三体结构。

NUCLEOTIDE SEQUENCE OF THE VP6 GENE OF GROUP A ROTAVIRUS FIELD STRAIN AND THE EXPRESSION IN BACULOVIRUS EXPRESSION SYSTEM