马疱疹病毒1型囊膜蛋白gD多克隆抗体制备及亚细胞定位 |
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引用本文: | 王世民,张艳楠,杨永龙.马疱疹病毒1型囊膜蛋白gD多克隆抗体制备及亚细胞定位[J].病毒学报,2017,33(3):419-424. |
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作者姓名: | 王世民 张艳楠 杨永龙 |
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作者单位: | 新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052;新疆医科大学药学院,乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区药物研究所,乌鲁木齐830004 |
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摘 要: | 本研究通过间接免疫荧光技术,确定了EHV-1囊膜蛋白gD单独表达于BHK-21细胞内的亚细胞定位情况,为其亚细胞定位机制及病毒二级囊膜的研究奠定了基础。以EHV-1基因组为模板,利用PCR方法扩增gD部分基因,并构建其原核表达载体pET28-gD,转入BL21(DE3)感受态细胞内进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化gD重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫实验小鼠并制备抗囊膜蛋白gD的多克隆抗体;分别以间接ELISA方法及Western blot方法检测抗体效价及反应性;人工转染pVAX-Kozak-gD重组质粒至BHK-21细胞,利用IF技术对囊膜蛋白gD进行亚细胞定位。结果表明:成功表达了大小约29kD的gD重组蛋白;制备的多克隆抗体效价为1∶102 400,能较好地与囊膜蛋白gD真核表达产物特异性结合;通过IF方法确定囊膜蛋白gD大部分呈斑点状分布于宿主细胞核周围的胞质中,极少量定位于细胞核内。
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关 键 词: | 马疱疹病毒1型(EHV-1) 囊膜蛋白gD 多克隆抗体 亚细胞定位 |
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