| 内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达 |
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| 作者姓名： | 王瑾 邬敏辰 周晨妍 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学生物工程学院,江南大学生物技术教育部重点实验室,无锡,214122
2. 江南大学医药学院,无锡,214122 |
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| 摘 要： | 根据绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422菌株内切葡聚糖酶基因egⅡ的cDNA序列,设计特异引物,以重组质粒pTG19-T-egⅡ为模板,扩增得到全长1 194bp的egⅡ成熟肽cDNA片段.将该片段分别克隆到大肠杆菌(Escherichia coil)表达载体pET-28a( )和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,并在大肠杆菌Rosset(DE3)和毕赤酵母GS115中进行了表达.重组大肠杆菌表达蛋白占菌体总蛋白的15%,表达产物无内切葡聚糖酶活性.重组毕赤酵母经甲醇诱导实现了分泌表达,在摇床水平上酶活性达到2 788U/ml.酶学性质分析表明,该酶作用的最适pH为4.5,pH 3.5～6.0范围内酶活性保留在80%以上;最适温度为50℃,55℃以下酶的稳定性在90%以上.
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| 关 键 词： | 绿色木霉 内切葡聚糖酶 大肠杆菌 毕赤酵母 表达 酶学性质 内切 葡聚糖酶基因 大肠杆菌 重组毕赤酵母 分泌表达 Endoglucanase Expressions Gene Pichia pastoris 酶的稳定性 最适温度 范围 作用 分析表 酶学性质 水平 摇床 甲醇诱导 酶活性 总蛋白 |
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