| 美洲鲽抗冻蛋白基因的克隆及在E.coli中的表达 |
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| 引用本文： | 杨志兴 Force,L. 美洲鲽抗冻蛋白基因的克隆及在E.coli中的表达[J]. 生物技术, 1991, 1(4): 11-16 |
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| 作者姓名： | 杨志兴 Force L |
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| 作者单位： | 黑龙江省科学院应用微生物研究所 哈尔滨(杨志兴)，加拿大阿尔伯塔省研究院生物工程系 埃德蒙顿(Lender Force) |
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| 摘 要： | 本文报告了美洲鲽抗冻蛋白基因的克隆及在E.coli中表达的研究,以质粒P~(CT5)作为抗冻蛋白基因的供体,p~(ORF-2)作为表达载体。用HpaⅡ酶从质粒p~(CT5)上切下抗冻蛋白基因片段,再经Bal 31酶,绿豆核酸酶处理,连接上BglⅡ接头,然后插入到p~(ORF-2)的BglⅡ位点上,借助于p~(ORF-2)上的β-半乳糖苷酶基因的活性,使含正确插入抗冻蛋白基因的克隆呈现出蓝色菌落,共获得4000多个转化子,其中有201个蓝色克隆。对于50个蓝色克隆提取质粒DNA,电泳后发现均大于p~(ORF-2)。用BglⅡ消化后,可以发现有300—1500bpDNA片段,同时确定了抗冻蛋白基因在p~(ORF-2)中的插入方向,对于正确插入的克隆作出部分限制性内切酶图谱,测定出插入的抗冻蛋白基因片段的DNA序列,然后将重组质粒从E.coli MH1000菌株转化到E.coliTK1046中,研究分析表达产物,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳结果证明插入的抗冻蛋白的基因已表达,有明显的融合蛋白带,分子量大于β-半乳糖苷酶、是由大肠杆菌的外膜蛋白F,抗冻蛋白和β-半乳糖苷酶组成。融合蛋白含量占总蛋白的20％左右。
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| 关 键 词： | 美洲鲽 抗冻蛋白 基因 克隆 表达 |
Cloning of antifreezing protein gene of Pseudopleuronectes americanus and its expression .n E. coli. |
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| Yang Zhixing. Cloning of antifreezing protein gene of Pseudopleuronectes americanus and its expression .n E. coli.[J]. Biotechnology, 1991, 1(4): 11-16 |
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| Authors: | Yang Zhixing |
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| Keywords: | Winter flouder Antifreezing protein gene Fusion protein |
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