Rb蛋白功能缺陷降低肝细胞对TGF-β的敏感性

目的：探讨肝细胞内视网膜母细胞瘤（Rb）基因缺陷对转化生长因子-β（TGF-β）诱导的细胞周期静止的影响。方法：分离并培养原代肝细胞，特异性siRNA腺病毒封闭细胞内Rb基因表达后加入TGF-β诱导，然后MTT法检测细胞生长变化，流式细胞仪检测细胞周期变化，并用Western blot和荧光定量逆转录聚合酶反应（FQ-RT-PCR）法检测细胞中pRb、E2F、c-MYC和p16的表达变化。结果：原代培养肝细胞感染Rb-siRNA重组腺病毒后，正常对照肝细胞抑制率高于Rb基因封闭的肝细胞（69.76%，p<0.01），流式细胞检测可见对照组TGF-β诱导后处于G1期的肝细胞数明显增多（99.80%，p<0.05），而在Rb基因封闭组中，TGF-β诱导后各细胞周期分布与未诱导的正常肝细胞基本一致。Western blotting检测可见48h时对照组TGF-β诱导后，E2F和c-MYC蛋白表达减少而p16高表达，Rb基因封闭组TGF-β诱导后c-MYC表达减少而p16表达增高。结论：TGF-β可诱导肝细胞静止于G1期，而Rb基因功能缺陷的肝细胞对TGF-β的诱导敏感性显著降低。