| 赭曲霉毒素A降解菌株的筛选及脱毒酰胺水解酶的基因克隆和表达 |
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| 引用本文： | 刘斌,全思语,张豪,宋卓琳,黄明珠,何健,陈雪岚.赭曲霉毒素A降解菌株的筛选及脱毒酰胺水解酶的基因克隆和表达[J].微生物学通报,2023,50(7):2837-2847. |
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| 作者姓名： | 刘斌 全思语 张豪 宋卓琳 黄明珠 何健 陈雪岚 |
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| 作者单位： | 江西师范大学生命科学学院, 江西 南昌 330022;江西师范大学生命科学学院, 江西 南昌 330022;江西师范大学国家淡水鱼加工技术研发专业中心, 江西 南昌 330022;南京农业大学生命科学学院 农业农村部农业环境微生物工程重点开放实验室, 江苏 南京 210095 |
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| 基金项目： | 江西省自然科学基金(20224BAB215005)；国家自然科学基金(31960014,31660019)；江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ210323) |
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| 摘 要： | 【背景】赭曲霉毒素A (ochratoxin A, OTA)是一种可以致癌的真菌毒素，其污染严重影响食品安全，危害人类健康。生物降解法去除OTA污染是近些年的研究热点，发掘高效的OTA降解脱毒酶资源具有重要的意义。【目的】筛选高效的OTA降解菌株并从中克隆降解基因，为生物脱毒方法的开发提供基因和酶资源。【方法】利用OTA为唯一碳源的筛选培养基从土壤中筛选纯化OTA降解菌株，通过16S rRNA基因序列分析确定其分类地位，利用高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)分析其降解产物。通过同源序列比对的方法克隆降解基因并与载体pET-29a(+)相连，然后在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。利用Ni2+亲和层析对表达产物进行纯化，研究其对OTA的降解活性和酶学特征。【结果】筛选到一株高效的OTA降解菌株，在12 h内能够完全降解1 μg/mL的OTA；初步鉴定该菌株属于Niastella，编号为JX-6；菌株JX-6通过酰胺键断裂途径降解OTA生成无毒的OTα；从菌株JX-6中鉴定了一个OTA酰胺水解酶，命名为NcOTase；NcOTase与已报道的OTA酰胺水解酶序列相似性较低，仅为31%–53%；纯化的NcOTase具有OTA水解活性，比酶活为60.3 U/mg，活性显著高于大部分已报道的OTA降解酶。【结论】NcOTase是一个高效的OTA降解脱毒酶，在去除食品和饲料中OTA污染方面具有很好的应用前景。
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| 关 键 词： | 真菌毒素 赭曲霉毒素A 生物降解 酰胺水解酶 酶活性 |
| 收稿时间： | 2022/9/25 0:00:00 |
Isolation of ochratoxin A-degrading bacteria strain, molecular cloning and expression of detoxification amidohydrolase |
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| LIU Bin,QUAN Siyu,ZHANG Hao,SONG Zhuolin,HUANG Mingzhu,HE Jian,CHEN Xuelan.Isolation of ochratoxin A-degrading bacteria strain, molecular cloning and expression of detoxification amidohydrolase[J].Microbiology,2023,50(7):2837-2847. |
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| Authors: | LIU Bin QUAN Siyu ZHANG Hao SONG Zhuolin HUANG Mingzhu HE Jian CHEN Xuelan |
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| Institution: | College of Life Sciences, Jiangxi Normal University, Nanchang 330022, Jiangxi, China;College of Life Sciences, Jiangxi Normal University, Nanchang 330022, Jiangxi, China;National R&D Center for Freshwater Fish Processing, Jiangxi Normal University, Nanchang 330022, Jiangxi, China;Key Laboratory of Agricultural Environmental Microbiology of Ministry of Agriculture and Rural Affairs, College of Life Sciences, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mycotoxins ochratoxin A biodegradation amidohydrolase enzymatic activity |
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