| CALB脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化 |
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| 引用本文： | 朱艳飞,杨博. CALB脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(10): 55-59 |
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| 作者姓名： | 朱艳飞 杨博 |
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| 作者单位： | 华南理工大学生物科学与工程学院生物技术系 广州 510006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，高等学校博士学科点专项科研基金，国家支撑计划 |
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| 摘 要： | 根据南极假丝酵母脂肪酶calb的成熟多肽序列，人工合成了由毕赤酵母（Pichia pastoris)偏爱密码子组成的calb基因序列（仅成熟肽）。将该基因克隆至穿梭质粒pGAPZαΑ中，获得的重组质粒pGAPZαA calb 经线性化后转入毕赤氏酵母GS115菌株,构建成组成型表达CALB的酵母工程菌株。酵母转化子在YPD 培养基上传代10 次后, 其外源基因未丢失。经摇瓶发酵4天后，CALB水解活力为14.5U/ml。经脱盐和阴离子交换两步纯化后，其纯度达到了95%以上，目的蛋白的含量达到了220mg/L。
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| 关 键 词： | lipase B from Candida antarctica (CALB) 毕赤酵母 组成型表达 纯化 |
| 收稿时间： | 2009-05-14 |
| 修稿时间： | 2009-06-15 |
The Constitutive Expression of CALB in Pcihia pastoris and Purification of Product |
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| ZHU Yan-fei,YANG Bo. The Constitutive Expression of CALB in Pcihia pastoris and Purification of Product[J]. China Biotechnology, 2009, 29(10): 55-59 |
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| Authors: | ZHU Yan-fei YANG Bo |
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| Affiliation: | School of Bioscience & Bioengineering,South China University of Technology,Guanzhou 510006,China |
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| Abstract: | The artificially synthetic gene calb(only mature peptide sequence) was inserted into a yeast constitutive vector, pGAPZαA. Under the control of the promoter GAP(glyceraldehydes 3 phosphate dehydrogenase)CALB was expressed constitutively. The yeast transformants still had the foreign gene after ten times of passage in YPD medium.The activity of CALB in shake flask cultured 4 days achieved 14.5U/ml.And after two steps of purification (the desalinization and DEAE column), purity of the final protein achieved 95% and protein concentration has achieved 220mg/L. |
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| Keywords: | lipase B from Candida antarctica(CALB) |
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