向日葵单染色体显微分离及特异文库的构建

采用玻璃针分离法，通过显微操作系统成功地分离到内葵杂3号三交种和单交种的随体染色体，经两轮LA．PCR扩增得到250～1500bp的DNA片段。用各自的基因组DNA标记成探针，与随体染色体扩增产物进行Southern杂交，显示杂交信号，证明内葵杂3号三交种和单交种随体染色体DNA已被成功扩增。将第2轮PCR产物构建质粒文库，得到三交种和单交种克隆数分别约为2．26×10^5和2．57×10^5。各随机挑取30个重组子进行分析，发现插入片段大小分别为200-700bp和200～500bp，平均插入片段大小分别为535bp和480bp。这是染色体微分离与微克隆技术首次在向日葵上的应用。