硫酸酯化马尾松花粉多糖对小鼠脾脏B淋巴细胞免疫调节作用的研究

研究60％乙醇提取的马尾松花粉多糖组分D（PPM60-D）及其硫酸酯化物（SPPM60-D）对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖、细胞内游离钙离子浓度（Ca2＋]i）及抗体生成的影响。水煮醇沉法提取得到粗多糖，乙醇分级沉淀得到60％乙醇沉淀多糖PPM60，SephacrylS-400HR分离纯化得到多糖组分D，用氯磺酸-吡啶法对组分D进行硫酸酯化，尼龙毛法分离B淋巴细胞，MTT法测定其增殖，荧光分光光度计测定B淋巴细胞Ca2＋]i，溶血空斑实验（PFC）和定量溶血分光光度（QHs）法测定B细胞抗体生成情况。结果显示，SPPM60-D相对于PPM60-D能更显著地提高B淋巴细胞的增殖以及Ca2＋]i（P〈0．011：经TAK-242、LY294002、U73122、低分子肝素、维拉帕米和2-APB抑制剂作用后，均可抑制SPPM60-D和PPM60-D所致的Ca2＋]i）升高（P〈0．05或P〈0．01）；PFC和QHS检测证实，SPPM60-D对于促进B淋巴细胞的分化及抗体的生成有显著作用，而PPM60-D的作用较弱。以上研究表明，PPM60-D经过硫酸酯化改性后，活性明显提高，推测SPPM60-D可与B淋巴细胞上TOLL样受体4（TLR4）结合，通过TLR4-P13K-PLC—IP3R信号通路使钙库释放激活的钙通道（CRAC）打开，从而使Ca2＋]i）升高来激活B淋巴细胞，进而提高其体外增殖和抗体生成能力。