| K-Ras~(G12D)基因突变体慢病毒载体的构建及其鉴定 |
| |
| 引用本文： | 赵善民汤球刘志学余琛琳孙伟蔡丽萍袁子彦徐晨崔淑芳.K-Ras~(G12D)基因突变体慢病毒载体的构建及其鉴定[J].现代生物医学进展,2014,14(2):223-225. |
| |
| 作者姓名： | 赵善民汤球刘志学余琛琳孙伟蔡丽萍袁子彦徐晨崔淑芳 |
| |
| 作者单位： | 第二军医大学实验动物中心 |
| |
| 基金项目： | 上海市科技发展基金项目（10140900800） |
| |
| 摘 要： | 目的:构建K-RasG12D基因突变体慢病毒载体。方法:从病人组织中提取RNA通过RT-PCR反转录获得cDNA作为K-RasG12D基因模板,通过PCR法扩增出K-RasG12D基因突变体片段。将酶切的片段克隆入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP中,构建K-RasG12D基因突变体逆转录病毒真核表达载体。将连接产物转化至感受态大肠埃希菌DH5α,挑取转化平板上的细菌克隆,在抗生素培养液中培养过夜后进行PCR鉴定。经测序正确后转染293T细胞系,利用重组质粒PCR及串联基因表达的检测等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定。结果:所构建的K-RasG12D突变体基因逆转录病毒真核表达载体经PCR鉴定和测序鉴定正确,转染293T细胞后可以观察到可检测到高强度表达的RFP荧光信号。结论:成功构建了重组真核表达载体,为下一步建立稳定转染细胞系及进一步研究K-Ras突变在癌症发病中的作用奠定了基础。
|
| 关 键 词： | K-Ras G12D突变体 真核表达 |
Construction and Identification of Retrovirus Vector of K-Ras Gene
Mutation (G12D)* |
| |
| ZHAO Shan-min,TANG Qiu,LIU Zhi-xue,YU Chen-lin,SUN Wei,CAI Li-ping,YUAN Zi-yan,XU Chen,CUI Shu-fang.Construction and Identification of Retrovirus Vector of K-Ras Gene
Mutation (G12D)*[J].Progress in Modern Biomedicine,2014,14(2):223-225. |
| |
| Authors: | ZHAO Shan-min TANG Qiu LIU Zhi-xue YU Chen-lin SUN Wei CAI Li-ping YUAN Zi-yan XU Chen CUI Shu-fang |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | K-Ras Gene mutation Eukaryotic expression |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《现代生物医学进展》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《现代生物医学进展》下载免费的PDF全文 |
|
