巴西固氮螺菌中PⅡ和Pz在固氮调节中的不同使用

在巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense)中，glnB和glnZ是两个高度同源基因，分别位于3.7kgb/EcoRI PstI和3.7kb/SalI的两个不同的染色体片段上。用卡那霉素盒（Km^r-cas-sette)插入法，对glnB和glnZ分别进行定位诱变，并获得相应的突变株，即glnB^-和glnZ^-。研究表明，glnB^-突变株丧失固氮酶活性，表现为Nif^-，glnZ^-象野生型菌株一样具有固氮酶活性。为了进一步研究这两个基因的功能，将glnB和glnZ分别构建在pVK100载体上形成重组质粒pVK-Ⅱ和pVK-Z,对glnB^-和glnZ^-突变株进行互补实验，进一步证明了glnB与固氮酶活直接相关性，而glnZ无此作用。同时，通过三亲接合法将pVK-Ⅱ和pVK-Z分别转移到巴西固氮螺菌野生型Yu62和具有一定抗铵能力的draT^-突变株中，使glnB和glnZ的拷贝数增加，进一步比较它们的固氮酶活性。结果表明多拷贝的glnB基因，能显著提高固氮酶活性，而多拷贝的glnZ对固氮酶活性无影响。同时，将pVK-Ⅱ和pVK-Z分别转移到nifA^-突变株中，结果表明glnB和glnZ均不能恢复nifA^-的固氮酶活性。