| 利用RNAi抑制曼地亚红豆杉细胞紫杉烷14β-羟基化酶基因的表达 |
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| 引用本文： | 李凤岚,邱德有,马小军,刘敏,许德荣.利用RNAi抑制曼地亚红豆杉细胞紫杉烷14β-羟基化酶基因的表达[J].中国生物工程杂志,2009,29(5):55-60. |
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| 作者姓名： | 李凤岚 邱德有 马小军 刘敏 许德荣 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院-中国协和医科大学药用植物研究所
2. 国家林业局林木培育重点实验室
3.中国林业科学院林业研究所 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金，中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 |
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| 摘 要： | 目的：利用RNA干扰技术抑制紫杉烷14β-羟基化酶(简称14OH)基因的表达。方法：以曼地亚红豆杉(Taxus×media)为材料，通过农杆菌介导的双元载体转化系统将针对14OH基因构建的RNA干扰载体导入该植物细胞中。应用PCR-Southern技术对转基因细胞进行了鉴定。另外，利用RT-PCR技术检测14OH基因mRNA表达水平，并采用HPLC技术对转基因细胞系中三种C-14氧取代的紫杉烷成分进行测定。结果：Southern检测证实转基因实验获得成功，RT-PCR结果表明转基因细胞系中14OH基因mRNA表达水平与对照组相比显著下降，HPLC分析显示C-14氧取代的紫杉烷含量也有明显降低。结论：该RNA干扰技术有效地抑制了曼地亚红豆杉细胞内14OH基因的表达，有望为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新途径。
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| 关 键 词： | RNA干扰 基因表达 曼地亚红豆杉 紫杉烷14β-羟基化酶 |
| 收稿时间： | 2008-12-19 |
| 修稿时间： | 2009-01-20 |
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