| 利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列 |
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| 引用本文： | 王德培,孙伟,李明春,魏东盛,张颖慧,邢来君. 利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列[J]. 生物工程学报, 2006, 22(4): 581-586 |
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| 作者姓名： | 王德培 孙伟 李明春 魏东盛 张颖慧 邢来君 |
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| 作者单位： | 南开大学微生物系、天津市微生物功能基因组学重点实验室,天津,300071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No.30200176)，天津市自然科学基金资助项目(No.013802511)。~~ |
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| 摘 要： | 用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As3.2806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。
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| 关 键 词： | 雅致枝霉 长引物 巢式反向PCR Δ~6-脂肪酸脱氢酶 |
| 文章编号： | 1000-3061(2006)04-0581-06 |
| 收稿时间： | 2006-02-09 |
| 修稿时间： | 2006-04-05 |
A Method Using Long Primers for Cloning the Upstream Sequence of Delta-6 Fatty Acid Desaturases Gene of Thamnidium elegans by Nested Inverse PCR |
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| WANG De-Pei,SUN Wei,LI Ming-Chun,WEI Dong-Sheng,ZHANG Ying-Hui,XING Lai-Jun. A Method Using Long Primers for Cloning the Upstream Sequence of Delta-6 Fatty Acid Desaturases Gene of Thamnidium elegans by Nested Inverse PCR[J]. Chinese journal of biotechnology, 2006, 22(4): 581-586 |
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| Authors: | WANG De-Pei SUN Wei LI Ming-Chun WEI Dong-Sheng ZHANG Ying-Hui XING Lai-Jun |
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| Affiliation: | Tianjin Key Laboratory of Microbial Funitional Genomics, Department of Microbiology, NanKai University, Tianjin 300071, China |
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