| 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质 |
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| 引用本文： | 郑仁朝,王天真,黎小军,郑裕国.摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质[J].生物工程学报,2014,30(1):129-138. |
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| 作者姓名： | 郑仁朝 王天真 黎小军 郑裕国 |
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| 作者单位： | 浙江工业大学 生物工程研究所，浙江 杭州 310032；浙江工业大学 生物转化与生物净化教育部工程研究中心，浙江 杭州 310032;浙江工业大学 生物工程研究所，浙江 杭州 310032；浙江工业大学 生物转化与生物净化教育部工程研究中心，浙江 杭州 310032;浙江工业大学 生物工程研究所，浙江 杭州 310032；浙江工业大学 生物转化与生物净化教育部工程研究中心，浙江 杭州 310032;浙江工业大学 生物工程研究所，浙江 杭州 310032；浙江工业大学 生物转化与生物净化教育部工程研究中心，浙江 杭州 310032 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) (No. 2012AA022201B)，浙江省重大科技专项重大社会发展项目(No. 2012C03005-2)资助。 |
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| 摘 要： | 立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。
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| 关 键 词： | 摩氏摩根菌 酯酶 分离纯化 酶学性质 (S)--羧乙基--氰基--甲基己酸 |
| 收稿时间： | 2013/6/16 0:00:00 |
Purification and characterization of esterase from Morganella morganii ZJB-09203 |
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| Renchao Zheng,Tianzhen Wang,Xiaojun Li and Yuguo Zheng.Purification and characterization of esterase from Morganella morganii ZJB-09203[J].Chinese Journal of Biotechnology,2014,30(1):129-138. |
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| Authors: | Renchao Zheng Tianzhen Wang Xiaojun Li and Yuguo Zheng |
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| Institution: | Institute of Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China; Engineering Research Center of Bioconversion and Biopurification of Ministry of Education, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China;Institute of Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China; Engineering Research Center of Bioconversion and Biopurification of Ministry of Education, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China;Institute of Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China; Engineering Research Center of Bioconversion and Biopurification of Ministry of Education, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China;Institute of Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China; Engineering Research Center of Bioconversion and Biopurification of Ministry of Education, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, Zhejiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Morgarella morganii esterase purification enzyme characteristics (S)-2-carboxyethyl-3-cyano-5-methylhexanoic acid |
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