HIV-1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件 |
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引用本文: | 孙凤强,方彧聃,王娟,张帆,马海燕,张敬之.HIV-1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件[J].国外医学:分子生物学分册,2010(5):377-381. |
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作者姓名: | 孙凤强 方彧聃 王娟 张帆 马海燕 张敬之 |
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作者单位: | 上海交通大学医学遗传研究所,卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室,上海市200040 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2007AA021206),国家自然科学基金(No.30870943),上海市自然科学基金(No.08ZRl412100) |
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摘 要: | 目的研究HIV-1载体中的一些元件如Rev和Tat蛋白对其骨架的转录及外源基因表达水平的影响。方法将HIV-1表达GFP载体(FUGW)单独或分别与Rev蛋白表达质粒(pLP2)、Tat蛋白表达质粒(pcDNA3.1-Tat),及表达Rev和Tat蛋白的质粒(△8.9)等摩尔共转染人293T细胞后,经实时定量RT-PCR、FACS、荧光显微镜镜检等方法检测,比较其表达量。结果Rev与RRE结合后,载体骨架及外源基因的转录是单独转染FUGW时的3倍,Tat与TAR结合后,则提高其骨架及外源基因的转录近4倍,而Rev和Tat蛋白的协同作用,其转录本则可提高至6倍。FACS和荧光显微镜镜检也显示GFP蛋白表达量明显提高。F-TPO载体(HIV-1载体乳腺特异表达促血小板生成素)与△8.9在小鼠乳腺上皮细胞HC-11共转染和表达,则TPO蛋白的表达量接近pcDNA3.1-TPO载体的8倍。结论HIV-1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件,可提高其骨架的转录和外源基因的表达,且该现象并不依赖于细胞类型和外源基因的种类。
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关 键 词: | HIV-1载体 Rev蛋白 Tat蛋白 Rev应答元件 转录启动反应因子 |
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