重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN(1~4)的构建及表达 |
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作者姓名: | 苏超 朱梦瑜 高星杰 王鑫廷 张桂敏 付晓 葛林 杨洁 |
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作者单位: | [1]国家教育部免疫微环境与疫病重点实验室,天津市300070 [2]天津市细胞与分子免疫学重点实验室,天津市300070 [3]天津医科大学基础医学研究中心,免疫学教研室天津市300070 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划资助项目(863计划) (No.2007AA02Z115),国家自然科学基金(No.30670441,30970562,30670802,30811130394.30911130165,30970582),天津巿科委国际合作项目(No.07JCZDJC07300),国家自然科学基金重大研究计划项目(No.90919032).国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No.20091202110001,天津市教委重点项目(No.2008ZD01) |
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摘 要: | 目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuelease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与(;"蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN(1~4)重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN(1-4)质粒成功构建和表达.
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关 键 词: | 人类Tudor-SN蛋白 pGEX-4T-1 重组质粒 融合蛋白 |
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