| pBR322-Red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用 |
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| 引用本文： | 陈伟, 于梅, 李山虎, 王鸣刚, 周建光,.pBR322-Red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用[J].生物工程学报,2005,21(2). |
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| 作者姓名： | 陈伟 于梅 李山虎 王鸣刚 周建光 |
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| 作者单位： | 1.军事医学科学院生物工程研究所; 2.厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室; |
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| 摘 要： | pBR32 2 - Red是一种新型重组工程系统 ,它携带了λ-噬菌体Red重组酶基因和一系列调控元件。对pBR32 2 Red最优重组条件进行探索后应用该质粒提供的体内同源重组功能 ,在菌株W3110体内 ,对染色体上的lac操纵子进行了基因修饰 ,包括 :①运用kan-sacB选择反选择方法和重叠引物方法敲除了阻遏基因lacI,②运用kan -sacB选择反选择方法和线性双链DNA介导的DNA重组方法将报告基因lacZ敲入lacA和lacY的位置 ,并且首次测定了报告基因lacZ在这三个结构基因位置的组成性表达情况。结果表明运用不同的重组策略 ,pBR32 2- Red系统都能方便有效地对大肠杆菌W3110染色体进行基因敲除和敲入修饰。
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| 关 键 词： | pBR322-Red 同源重组 lac操纵子 敲除 敲入 |
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