| 乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究 |
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| 引用本文： | 黄庆生,马文煜,姜绍谆,樊英茹,张富泉,肖毅,丁天兵.乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究[J].中国病毒学,2000,15(4). |
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| 作者姓名： | 黄庆生 马文煜 姜绍谆 樊英茹 张富泉 肖毅 丁天兵 |
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| 作者单位： | 第四军医大学微生物学教研室,西安710032 |
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| 摘 要： | 本研究根据已知的乙脑病毒(JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT-PCR 技术,一次扩增出了JEV的全长cDNA,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游.阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功.其次,合成一条含有 RNA聚合酶启动子序列的5′引物,利用长模板RT-PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录.转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变.收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法.本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT-PCR快速制备JEV感染性RNA的方法,将为JEV 分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础.
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| 关 键 词： | 日本脑炎病毒 感染性RNA 体外转录 全长cDNA |
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