大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100的构建及应用

利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌(E.coliMycobacterium)穿梭表达质粒pBCG-2100，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽S转移酶(Glutathione Stransferase,GST)抗原基因在卡介苗(Bacillus Calmette Guerin,BCG)中的表达。以含人结核杆菌热休克蛋白(Heat shock protein,hsp)70基因全长序列的质粒pMT-70为模板，扩增出hsp70启动子，测序选出无错配的启动子，将其定向克隆入E.coliMycobacterium穿梭质粒pBCG-2000中，构建成E.coliMycobacterium穿梭表达质粒pBCG-2100。再将编码GST的cDNA按正确的阅读框顺序，克隆到pBCG-2100中hsp70启动子的下游，得到分枝杆菌表达质粒pBCG-GST。将pBCG-GST电转化入BCG中，筛选出重组BCG疫苗，经热诱导后所表达的重组GST(rGST)抗原，为可溶性蛋白，经纯化后，在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带，其表达量占BCG菌体总蛋白的13%。Western blot提示rGST能与抗GST的抗体反应。