人凝血因子Ⅶ单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗人凝血因子Ⅶ单克隆抗体并鉴定其特性。方法：应用杂交瘤融合技术，以重组人凝血因子Ⅶ为抗原免疫BALB／c小鼠；取免疫小鼠的脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对单克隆抗体的特异性进行鉴定；用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水，应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化。结果：获得了3株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞3E8、3D2和1C5，诱生的腹水效价分别为1：1×10^7、1：1×10^6和1：1×10^6；亚类鉴定表明388为IgG2a，其余2株均为IgGl；特异性鉴定显示它们与多种血浆蛋白均无交叉反应，表明单抗是特异的；经过亲和层析，获得了纯化的单抗。结论：获得了特异性的人凝血因子Ⅶ单克隆抗体，为建立人凝血因子Ⅶ检测及纯化方法奠定了基础。