斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅡcDNA的克隆及在原核细胞中的表达

采用同源克隆结合RACE的方法克隆了斜纹夜蛾的普通气味结合蛋白Ⅱ（S1GOBPⅡ）的cDNA序列（GenBank登录号为EU086371）。序列分析表明，S1GOBPⅡ可读框序列为489bp，编码162个氨基酸，分子量为18.2kD，等电点为5.72。S1GOBPⅡ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征，即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基，呈酸性。S1GOBPⅡ氨基酸序列与草地贪夜蛾（S.frugiperda）和甜菜夜蛾（S.exigua）气味结合蛋白具有较高的同源性。RT-PCR和Northem blot检测表明，SIGOBPⅡ具有触角组织表达特异性。将S1GOBPⅡ，克隆到表达载体pET-32a上，阳性重组子转化表达宿主菌BL21（DE3）中，在IPTG诱导下进行了高效表达。SDS-PAGE检测表明S1GOBPⅡ在大肠杆菌中可表达相对分子质量（Mr）为32.0kD的可溶性融合蛋白，Westem blot分析表明表达产物能与Ni-NTA螯合物特异性结合，表明表达的S1GOBPⅡ为N端带有6His标签的融合蛋白。利用Ni^2＋-NTA亲和柱进一步纯化了S1GOBPⅡ，以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗S1GOBPⅡ的抗血清，ELISA滴度为1：12800，Western印迹检测结果显示，S1GOBPⅡ抗血清与表达的融合蛋白呈阳性反应，表明所表达的融合蛋白仍保持原有蛋白的免疫原性。