斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅡcDNA的克隆及在原核细胞中的表达 |
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作者姓名: | 金丰良 董小林 许小霞 任顺祥 |
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作者单位: | 华南农业大学资源环境学院昆虫学系,教育部生物防治工程研究中心 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展计划(批准号: 2006CB102005)和公益性行业科研专项经费(批准号: 200803005)资助项目 |
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摘 要: | 采用同源克隆结合RACE的方法克隆了斜纹夜蛾的普通气味结合蛋白Ⅱ(S1GOBPⅡ)的cDNA序列(GenBank登录号为EU086371)。序列分析表明,S1GOBPⅡ可读框序列为489bp,编码162个氨基酸,分子量为18.2kD,等电点为5.72。S1GOBPⅡ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基,呈酸性。S1GOBPⅡ氨基酸序列与草地贪夜蛾(S.frugiperda)和甜菜夜蛾(S.exigua)气味结合蛋白具有较高的同源性。RT-PCR和Northem blot检测表明,SIGOBPⅡ具有触角组织表达特异性。将S1GOBPⅡ,克隆到表达载体pET-32a上,阳性重组子转化表达宿主菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行了高效表达。SDS-PAGE检测表明S1GOBPⅡ在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为32.0kD的可溶性融合蛋白,Westem blot分析表明表达产物能与Ni-NTA螯合物特异性结合,表明表达的S1GOBPⅡ为N端带有6His标签的融合蛋白。利用Ni^2+-NTA亲和柱进一步纯化了S1GOBPⅡ,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗S1GOBPⅡ的抗血清,ELISA滴度为1:12800,Western印迹检测结果显示,S1GOBPⅡ抗血清与表达的融合蛋白呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白仍保持原有蛋白的免疫原性。
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关 键 词: | 斜纹夜蛾 触角 气味结合蛋白 基因克隆 原核表达 |
收稿时间: | 2008-06-04 |
修稿时间: | 2008-06-25 |
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