| 天蚕素A-蜂毒素杂合肽用pBV220载体的表达、纯化和活性测定 |
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| 引用本文： | 王云起 刘飞鹏 李月琴 张欣 蔡继业. 天蚕素A-蜂毒素杂合肽用pBV220载体的表达、纯化和活性测定[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(10): 29-33 |
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| 作者姓名： | 王云起 刘飞鹏 李月琴 张欣 蔡继业 |
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| 作者单位： | 1. 暨南大学化学系, 广州 510632;2. 暨南大学生物工程系, 广州 510632 |
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| 基金项目： | 国家“973”重点基础研究发展规划项目(2001CB510101)，国家自然科学基金重点项目(30230350)，广东省自然科学基金资助项目(970636) |
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| 摘 要： | 为提高抗菌肽的表达,在抗菌肽的N端融合了1段酸性小肽以中和表达产物对宿主的毒性;并将融合肽基因同向串连成多拷贝,在大肠杆菌中获得了较高的表达。用化学合成法分别合成了编码天蚕素A(1-8)-蜂毒素(1-10)杂合肽和酸性小肽的DNA片段,首先将其拼接成融合肽的完整基因,然后通过前后接头将融合肽基因连接成两侧具有EcoRI和SalI酶切位点的同向串连的多拷贝基因。将5份拷贝的基因克隆至pBV220表达载体,转化E.coliDH5α,温度诱导得到表达量为35%的融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式存在,将包涵体溶解,经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析获得纯化的融合蛋白。融合蛋白再经CNBr切割和阳离子交换层析,得到纯化的抗菌肽,经蛋白质N端测序确认序列正确。琼脂糖扩散法和液相测定法证明了纯化的抗菌肽具有抗菌活性。
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| 关 键 词： | 抗菌肽 多拷贝 融合蛋白 包涵体 |
| 收稿时间： | 2005-02-21 |
| 修稿时间： | 2005-05-17 |
Expression of Cecropin A-Melittin Hybrid Peptide by pBV220 Vector and Its Purification and Activity Assay |
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| WANG Yun-qi, LIU Fei-peng, LI Yue-qin, ZHANG Xin, CAI Ji-ye. Expression of Cecropin A-Melittin Hybrid Peptide by pBV220 Vector and Its Purification and Activity Assay[J]. China Biotechnology, 2005, 25(10): 29-33 |
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| Authors: | WANG Yun-qi LIU Fei-peng LI Yue-qin ZHANG Xin CAI Ji-ye |
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| Affiliation: | 1. Department of Chemistry, Jinan University Guangzhou 510632,China; 2. Department of Bioengineering, Jinan University Guangzhou 510632, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Antimicrobial peptide Multiple copies Fusion protein Inclusion bodies |
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