| 猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用 |
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| 引用本文： | 娄忠子,兰喜,李建强,李学瑞,李志勇,殷相平,柳纪省.猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用[J].生物技术通报,2010(1). |
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| 作者姓名： | 娄忠子 兰喜 李建强 李学瑞 李志勇 殷相平 柳纪省 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所传染病室,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,农业部兽医公共卫生重点开放实验室,兰州,730046 |
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| 基金项目： | 科技部科研院所社会公益研究专项 |
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| 摘 要： | 以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后IPTG诱导表达,得到大小约为36.8kD的目的蛋白。将目的蛋白检测及纯化后免疫后BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,最终筛选出3株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞。ELISA叠加试验显示,3株单抗针对相同或邻近的PoIFN-γ抗原表位,制备的腹水中单抗间接ELISA效价为1×104。选取单抗IF-2株进行单抗的潜在应用研究,Westernblotting分析结果显示单抗IF-2株能与融合表达蛋白产生特异性反应,与pET-32a(+)标签蛋白无反应;间接免疫荧光检测(IFA)发现,在采用腺病毒表达系统表达PoIFN-γ的HEK-293细胞中散在大量特异性荧光。
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| 关 键 词： | 猪γ-干扰素 融合表达 单克隆抗体 潜在应用 |
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