| 人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定 |
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| 作者姓名： | 谷福 游淳 刘建平 程鏖 余垚 王翔 万大方 顾建人 袁汉英 李育阳 吕红 |
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| 作者单位： | 1. 山西省食品质量监督检验中心
2. 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室,上海,200433
3. 上海市肿瘤研究所,癌基因与相关基因国家重点实验室,上海,200032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;上海市科委资助项目;CNHLPP项目 |
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| 摘 要： | 发现并克隆了一个肝脏特异的人类DNA聚合酶基因, 是POLλ的一个剪接体, 命名为POLλ2. 该剪接本的cDNA长2206 bp, 包含一个1452 bp的开放阅读框, 编码482个氨基酸, 位于人10号染色体长臂24区, 长约7.9 kb, 包含8个外显子和7个内含子. 生物信息学分析表明, POLλ2蛋白和DNA聚合酶X家族成员高度同源, 并含有这个家族特有结构域POLx, 因此是一个DNA聚合酶X家族的新成员. 该剪接本的核苷酸序列和相应蛋白质氨基酸序列已提交至GenBank, 登录号为AY302442. 亚细胞定位实验证实, POLl2蛋白定位于细胞核; 人16种组织表达谱实验表明, POLl2在肝组织和睾丸组织中特异性高表达, 在卵巢组织中低表达, 而在其他组织中没有检测到表达. 癌和癌旁表达实验表明, 与正常肝组织和癌旁组织相比, 在15个肝癌组织的样本中有80%样本的POLλ上调表达, 导致POLλ2 和POLλ的mRNA分子的比例异常, 可能和肝癌的病理过程有关. 通过筛选菌株, E.coli BL21(DE3)CONDON Plus可以高效地表达可溶性POLλ2蛋白; 通过Ni-NTA resin 和Superdex-75纯化了POLλ2重组蛋白. 经过同位素α-32P-dCTP掺入实验, 证实了POLλ2具有DNA聚合酶活性.
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| 关 键 词： | 基因克隆 表达 纯化 DNA聚合酶活性 肝癌 POLλ2 |
| 收稿时间： | 2006-04-17 |
| 修稿时间： | 2006-04-14 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
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