人SDCT2β 3′-非翻译区基因表达负调控序列对mRNA稳定性的影响 |
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作者姓名: | 白雪源 陈香美 傅博 汪扬 |
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作者单位: | 中国人民解放军总医院暨军医进修学院,解放军肾脏病研究所,北京100853 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展计划项目(973)(2007CB507400),国家自然科学基金项目(30070288, 30270505)和国家自然科学基金创新研究群体基金项目(30121005). |
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摘 要: | 为探索人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因(high affinity sodium-dependent dicarboxylate transporter,SDCT2)3′端非翻译区是否在基因表达调控中起作用,首先通过生物信息学分析发现,在SDCT2βmRNA的3′端非翻译区内存在585nt的AU富含区(AU-rich region,AUR),其中包括3个AU富含元件(AU-rich element,ARE),然后将SDCT2β的AU富含区DNA片段插入报告基因GFP表达载体pcDNA-GFP的下游,构建pcDNA-GFP-AUR表达载体并转染HEK293、HKC和LLC-PK1细胞系,用Western blot和流式细胞仪检测细胞中GFP的表达水平.结果显示,SDCT2β的AU富含区序列可显著降低GFP的表达水平(P〈0.01).利用放线菌素D阻断RNA转录后,每隔2h从稳定转染的HEK293细胞中提取总RNA,用RNA印迹分析GFP mRNA的稳定性.结果显示GFP-AURmRNA较GFP mRNA不稳定.这些结果提示,在SDCT2β3′非翻译区的AU富含区内存在基因表达负调控区,该区可降低mRNA的稳定性、促进mRNA的降解,从而在转录后水平调控基因的表达.
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关 键 词: | 二羧酸转运蛋白 3′非翻译区 转录后调控 mRNA稳定性 |
收稿时间: | 2007-12-07 |
修稿时间: | 2008-01-15 |
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