跨膜型肿瘤坏死因子α稳定表达细胞株的构建

目的：在体内，相对分子质量为26×103的跨膜型肿瘤坏死因子α（mTNF-α）可被TNF转化酶（TACE）酶解成相对分子质量为17×103的游离型TNF-α（sTNF-α）。为评价新研发的TNF-α全人源单克隆抗体与mTNF-α的结合能力，以及该单抗的ADCC作用，须构建只能稳定表达mTNF-α而不受TACE影响的Sp2/0细胞株。方法：PCR扩增缺失了TACE酶切位点的人TNF-α野生型基因序列，构建pcDNA3.1（＋）-dTNF-α重组质粒并测序鉴定；重组质粒转染Sp2/0细胞，构建只能稳定表达mTNF-α的细胞株，用流式细胞仪检测其表达情况。结果：pcDNA3.1（＋）-dTNF-α重组质粒测序结果与设计缺失基因的碱基序列完全一致，重组质粒构建成功；转染的阳性细胞株经流式细胞仪检测有表达，其中Clone11、15、16的表达量最高。结论：跨膜型TNF-α稳定表达细胞株构建成功，可用于TNF-α全人源单克隆抗体体外药效的评价。