圈卷产色链霉菌分化基因sawB的结构与功能 |
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引用本文: | 聂丽平,王韫恂,贾君永,田宇清,谭华荣.圈卷产色链霉菌分化基因sawB的结构与功能[J].中国科学C辑,2000,30(3):266-275. |
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作者姓名: | 聂丽平 王韫恂 贾君永 田宇清 谭华荣 |
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作者单位: | 1. 中国科学院微生物研究所,北京,100080;辽宁师范大学生物系,大连,116029 2. 中国科学院微生物研究所,北京,100080 |
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基金项目: | 国家自然科学重点基金(批准号:39830010)和微生物资源前期开发国家重点实验室资助项目 |
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摘 要: | 以Sau3AI部分酶切野生型圈卷产色链霉菌7100(Streptomyces ansochromogenes 7100)染色体DNA,回收3~6 kb的DNA片段,插入到链霉菌表达载体pIJ702的BglⅡ位点,转化圈卷产色链霉菌白色突变株W19,得到了近3 000个转化子,从中筛选到了两个具有硫链丝菌素抗性和野生型灰色表型的转化子.进行了质粒提取和酶切分析,两个重组质粒分别命名为pNL-1和pNL-2(分别含有约5.2和5.8 kb的外源片段).通过亚克隆及突变株互补实验,将互补W19的基因定位在了1.25 kb的Pst Ⅰ-Apa Ⅰ片段上.DNA序列分析结果表明,该DNA片段中含有一个完整的可读框(ORF1),编码一个由295个氨基酸组成的蛋白质,该基因命名为sawB.利用Blast程序在蛋白数据库中比较发现,SawB与天蓝色链霉菌的一个转录调控蛋白WhiH具有81%的一致性.利用基因破坏策略研究了sawB的功能,结果发现,野生型菌株的sawB基因破坏后,丧失了孢子形成能力,由灰色表型转变为白色表型.显微镜下观察sawB突变株的气生菌丝长而直,顶部略有波浪形卷曲,螺旋程度有所下降.由此可知,sawB是与圈卷产色链霉菌形态分化有关的一个重要基因,它与菌丝螺旋及孢子形成直接相关.sawB的异源表达分析表明,sawB可互补天蓝色链霉菌whiH突变株C119,使之恢复到野生型表型,产生紧密螺旋及丰富的灰色孢子.
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关 键 词: | 链霉菌 发育分化 白基因 互补克隆 |
修稿时间: | 1999年6月28日 |
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