巴马猪NK细胞表型鉴定及猪CIK细胞诱导方法建立

目的获得巴马猪外周血淋巴细胞中NK细胞的表型及比例的数据,建立一种高效率猪CIK(cytokine-induced killer)细胞体外诱导培养的方法。方法分离巴马小型猪外周血淋巴细胞,通过检测CD2~+/CD8~+/CD3~-细胞以表征猪NK细胞的表型;通过优化诱导培养条件,提高诱导淋巴细胞中CIK的比例,建立高效率CIK细胞体外诱导方法。结果利用优化的诱导培养条件,在诱导培养第5天时CD3~-/CD2~+/CD8~+的NK细胞的比例可高达43.63%,较最初分离时NK细胞比例提升了5.59倍;细胞增殖活性实验表明诱导培养第5天时可见明显的3个荧光峰,表明诱导后细胞发生了3次分裂,理论上较最初分离增加了8倍;诱导细胞的qPCR表型分析表明该细胞群体在诱导培养第5天时相关的表面标志有明显的上升也与流式分析结果一致。结论建立了高效的猪CIK细胞体外诱导培养的方法。