人细小病毒B19基因组编码蛋白真核表达质粒的构建与鉴定

目的:构建人细小病毒B19(B19V)基因组编码蛋白的真核表达质粒,并对其表达进行鉴定,为研究B19V蛋白功能提供支持。方法:设计并合成B19V基因组编码蛋白VP1、VP2、NS1、11k Da、X、7.5k Da和VP1独特区域(VP1u)的PCR扩增引物,以B19V感染性克隆p B19-M20为模板,PCR扩增基因组编码蛋白的核苷酸序列,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)-HA-Flag,并进行酶切鉴定和核苷酸序列测定;将鉴定正确的重组质粒转染HEK293T细胞,通过免疫印迹分别检测病毒蛋白的表达情况。结果:构建了B19V 7种蛋白的真核表达质粒,免疫印迹鉴定表明均可表达相应的目的蛋白。结论:构建了B19V 7种蛋白的真核表达质粒,为深入研究B19V蛋白功能及其在致病机制中的作用奠定了基础。