| 表达HIV-1 gag重组鸡痘病毒的构建与筛选 |
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| 引用本文： | 朱羿龙,李昌,郭焱,刘存霞,杜寿文,王茂鹏,金宁一. 表达HIV-1 gag重组鸡痘病毒的构建与筛选[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(1): 57-63. DOI: 10.13523/j.cb.20140109 |
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| 作者姓名： | 朱羿龙 李昌 郭焱 刘存霞 杜寿文 王茂鹏 金宁一 |
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| 作者单位： | 1. 长春中医药大学 长春 130117;2. 军事医学科学院军事兽医研究所 省部共建吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室 长春 130122 |
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| 基金项目： | 国家科技重大专项（2012ZX10001005-006）；国家自然科学基金（81001342）；中国博士后科学基金（20110491803、2012T50859）资助项目 |
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| 摘 要： | 构建并筛选表达HIV-1 gag蛋白的重组鸡痘病毒,并对其进行鉴定。首先设计引物通过PCR技术扩增HIV-1 gag基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的鸡痘病毒穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-HIV gag。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF)进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR,RT-PCR,Western blot方法对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析。结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组鸡痘病毒基因组中,RT-PCR,Western blot结果表明HIV-1 gag在感染细胞内成功表达且具有抗原性。连续传代20次,PCR,RT-PCR,Western blot均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,而且病毒已经纯化。结论:成功获得表达HIV-1gag的重组鸡痘病毒,为进一步免疫试验研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 重组鸡痘病毒 HIV-1 gag 强型荧光蛋白 遗传稳定性 |
| 收稿时间： | 2013-11-04 |
| 修稿时间： | 2013-12-04 |
Construction and Selection of the Recombinant Fowlpox Expressing HIV-1 gag |
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| ZHU Yi-long,LI Chang,GUO Yan,LIU Cun-xia,DU Shou-wen,WANG Mao-peng,JIN Ning-yi. Construction and Selection of the Recombinant Fowlpox Expressing HIV-1 gag[J]. China Biotechnology, 2014, 34(1): 57-63. DOI: 10.13523/j.cb.20140109 |
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| Authors: | ZHU Yi-long LI Chang GUO Yan LIU Cun-xia DU Shou-wen WANG Mao-peng JIN Ning-yi |
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| Affiliation: | 1. Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117, China;2. Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control, Genetic Engineering Laboratory of PLA, Academy of Military Medical Sciences of PLA, Changchun 130122, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Srecombinant fowlpoxvirus HIV-1 gag EGFP Genetic stability |
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