甘蔗 UGPase 5’侧翼序列克隆及缺失表达分析简

以甘蔗(FN95;-1702)为材料，通过接头连接PCR方法克隆该基因不同长度5′侧翼序列。将不同长度的5′侧翼序列连同UGPase基因的外显子片段定向插入到GUS基因上游，在保证其后GUS编码框不发生偏移的情况下，插入的UGPase外显子融合GUS表达成为新的报告基因。根据此策略，构建了一系列表达结构为5′ Flanking Sequence-UGPase Exon-GUS-Nos polyA的5′侧翼序列缺失表达载体，进行启动子活性分析。注射法转染烟草叶片组织检测GUS瞬时表达，分析结果表明，所克隆到的UGPase基因5′端侧翼序列不具有启动子活性。