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| 日本七鳃鳗钙调蛋白分子克隆、组织定位及功能分析北大核心CSCD | |
| 作者姓名： | 张撼 董彦娇 李长炙 逄越 李庆伟 |
| 作者单位： | 1.辽宁师范大学生命科学学院116029;2.辽宁师范大学七鳃鳗研究中心116029; |
| 基金项目： | 国家重大基础研究发展规划(973计划课题；No.2013CB835304)；全国海洋公益项目(No.20130501)；国家自然科学基金项目(No.31170353；No.31202020)；辽宁省高等学校杰出青年学者成长计划项目(No.LJQ2014117)；大连市科技计划项目(No.2013E11SF056)资助~~ |
| 摘 要： | 钙调蛋白(calmodulin,CaM)是高度保守的钙离子结合蛋白质,可形成Ca2+-CaM复合体,从而调节细胞代谢以及靶酶的功能。日本七鳃鳗(Lampetra japonica)作为原始的无颌类脊椎动物,对研究脊椎动物分子起源进化及器官发育分化具有重要的研究价值。通过提取日本七鳃鳗髓组织总RNA,利用RT-PCR方法获得日本七鳃鳗CaM(简称Lj-CaM)基因并进行生物信息学分析。将LjCaM基因分别构建到原核表达载体p ColdⅠ和真核表达载体p EGFP-N1中,利用亲和层析技术纯化得到Lj-CaM蛋白。圆二色谱分析结果表明,Lj-CaM属于典型的α-螺旋结构型蛋白质。免疫印迹和免疫组化结果表明,CaM主要存在于日本七鳃鳗的肠、鳃、髓、肾组织中,在心和肝组织中几乎不表达。细胞免疫荧光结果显示,CaM定位于细胞核中。q PCR和免疫印迹方法检测发现,当293T细胞中Lj-CaM过表达时,对下游靶基因CaMKⅡ作用不明显,但促进PLA2G2A表达。本研究报道了日本七鳃鳗CaM结构、细胞组织定位分布以及基因调控研究,对其结构、分子起源与进化、分子调控及功能方面的研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 钙调蛋白 日本七鳃鳗 免疫荧光 实时定量PCR 免疫印迹 免疫组化 |
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