Burkholderia pickettii中D-乙内酰脲酶基因(dha)的克隆、测序及表达

对一株能转化D，L-对羟基苯乙内酰脲为D-对羟基苯甘氨酸的菌株MMR003进行了细菌分类学鉴定，该菌为皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pickettii)。实验通过Southern杂交，部分文库构建和筛选，并经一系列亚克隆测序分析，获得一长度为1374bp的完整开放阅读框，编码458个氨基酸的D-乙内酰脲酶基因。用该基因序列构建的高表达质粒pXZPH2转化E.coliBL21(DE3)，经IPTG诱导后，检测到D-乙内酰脲酶活性。该基因编码的氨基酸序列经Blast同源比较分析与放射形土壤杆菌NRRL B11291所产相应酶有85%的同源性。以D，L-对羟基苯乙内酰脲为底物测得的表达酶的活力为0.66u/mL，比相同条件下所测出发菌株MMR003的酶活提高了2倍。