小鼠仙台病毒TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立 |
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作者姓名: | 孙权麟 马跃宇 孙莉 费东亮 白杰英 张旭 李明 马鸣潇 |
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作者单位: | 1. 锦州医科大学;2. 北京大学未来技术学院分子医学研究院;3. 锦州市疾病预防控制中心 |
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基金项目: | 辽宁省科技厅科学技术计划项目(项目号:2020JH2/10300117),题目:免洗纳米等离子体免疫检测法用于检测兔瘟病毒和仙台病毒~~; |
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摘 要: | 仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子生物学诊断方法,本研究基于TaqMan-MGB探针荧光技术,根据GenBank中SeV的L基因的保守区段(8 556-15 242)序列,设计了1对特异性引物与1条5‵端携带羧基荧光素(FAM)与3‵端为淬灭基团(Eclipse)标记的TaqMan探针,标准品进行稀释建立标准曲线,并经反应条件优化,建立了TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、敏感性与重复性进行评估。结果显示,最佳优化反应条件为:反应体系,20μmol/L;引物和探针浓度,10μmol/L和15μmol/L;退火温度,54℃;在特异性试验中,除SeV检测出现特异性曲线外,其他鼠类常见病毒均未出现特异性曲线;在敏感性试验中,Sev最低检测限为5.29×101拷贝/μL。在重复性试验中,其批内变异系数为0.44%~0.77%,批间变异系数为...
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关 键 词: | 仙台病毒(SeV) TaqMan-MGB探针 qRT-PCR方法 |
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