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| 利用CRISPR/Cas9系统构建ITGαV及ITGβ3敲除细胞系 | |
| 作者姓名： | 胡艺欣 吴兴一 李泽辉 靳晓慧 胡慧 |
| 作者单位： | 1. 河南农业大学动物医学院;2. 河南省动物食品安全重点实验室 |
| 摘 要： | 本试验旨在采用CRISPR/Cas9技术获得整合素αV(Integrin αV,ITGαV)及整合素β3(Integrin β3,ITGβ3)基因敲除的猪睾丸(Swine testicle,ST)细胞系，进而在细胞水平上研究ITGαV及ITGβ3在猪δ冠状病毒(Porcine deltacorovirus,PDCoV)入侵过程中的作用及相互作用机制。根据GenBank上猪的ITGαV及ITGβ3基因序列分别设计三对引导RNA(sgRNA)，并整合到LentiCRISPR‐V2载体上，与辅助质粒pSPA×2及pMD2.G共转染293 T细胞进行慢病毒包装，包装完成后感染ST细胞并用嘌呤霉素进行压力筛选。用T7酶进行酶切检测，选出编辑效率较高的细胞群体，进一步用有限稀释法筛选出单克隆敲除细胞系。对分离出的ST‐ITGαVKO(敲除ITGαV基因的ST细胞)及ST‐ITGβ3KO(敲除ITGβ3基因的ST细胞)的单克隆细胞系进行测序和Western Blotting鉴定，结果显示ITGαV与ITGβ3均被成功敲除。采用敲除细胞系进行PDCoV感染试... |
| 关 键 词： | 整合素αV 整合素β3 CRISPR/Cas9 猪睾丸细胞 猪δ冠状病毒 |