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DNA末端硫修饰依赖的体外大片段DNA连接法
引用本文:胡媚月,吴更.DNA末端硫修饰依赖的体外大片段DNA连接法[J].微生物学通报,2023,50(3):1220-1230.
作者姓名:胡媚月  吴更
作者单位:上海交通大学生命科学技术学院 微生物代谢国家重点实验室, 上海 200030
基金项目:国家自然科学基金(31670106)
摘    要:【背景】DNA组装技术是基因组合成中的一个关键技术。探索低成本、高效率的基因组合成技术一直是合成生物学的重要研究领域。在某些细菌如变铅青链霉菌中,DNA上有磷硫酰化修饰(简称硫修饰),而在另一些细菌如天蓝色链霉菌中存在一种含有硫修饰识别结构域(sulfur-binding domain, SBD)的识别蛋白,可以特异性识别DNA上的硫修饰,这启发了我们发展出一种新的DNA组装技术。【目的】探究在DNA末端硫修饰的连接中,T4 DNA连接酶与SBD相融合蛋白和单独的T4 DNA连接酶相比,是否有更高的连接效率。【方法】根据同源重组原理,设计硫修饰引物,扩增硫修饰的DNA片段。构建T4 DNA连接酶与SBD融合蛋白的3种表达载体T4-linker-SBD(Hga)、T4-linker-SBD(Spr)和T4-linker-SBD(Mmo),表达纯化以上3种融合蛋白。比较3组浓度梯度(2.4、0.24、0.024 mg/mL) T4 DNA连接酶与融合蛋白在2.5 kb和8.0 kb DNA片段连接上的差异。【结果】DNA末端硫修饰的2.5kb和8.0kb的两端片段均能扩增,而且3种融合蛋白...

关 键 词:硫原子识别结构域  DNA连接组装  DNA硫修饰  基因组合成
收稿时间:2022/6/19 0:00:00

Assembling long DNA fragments with DNA sulfur modification in vitro
HU Meiyue,WU Geng.Assembling long DNA fragments with DNA sulfur modification in vitro[J].Microbiology,2023,50(3):1220-1230.
Authors:HU Meiyue  WU Geng
Institution:State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200030, China
Abstract:
Keywords:sulfur-binding domain (SBD)  DNA ligation and assembly  DNA sulfur modification  genome synthesis
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