| 番木瓜果糖-2,6-二磷酸酶CpF2KP基因克隆和蛋白表达纯化 |
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| 引用本文： | 左丽萍,曾秋霞,赵晓兵,杨丽媛,徐良伟,赖娟,岳晶晶.番木瓜果糖-2,6-二磷酸酶CpF2KP基因克隆和蛋白表达纯化[J].生物工程学报,2023,39(2):614-624. |
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| 作者姓名： | 左丽萍 曾秋霞 赵晓兵 杨丽媛 徐良伟 赖娟 岳晶晶 |
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| 作者单位： | 福建农林大学基因组与生物技术研究中心 福建省海峡植物应用系统生物学重点实验室, 福建 福州 350002;福建农林大学园艺学院, 福建 福州 350002 |
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| 基金项目： | 福建省科技厅对外合作项目（2021I0009）；福建农林大学科技创新专项基金项目（CXZX2020091A）；泉州市科技计划项目（2021N044） |
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| 摘 要： | 番木瓜是岭南四大名果之一,在我国东南部地区广泛种植,因其具有食用和药用双重价值,因此深受人们的青睐。果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是一个独特的双功能酶,具有激酶功能域和酯酶功能域,能催化生物体内糖代谢的重要调节物果糖-2,6-二磷酸(Fru-2,6-P_(2))的合成和降解。为了研究番木瓜中编码该酶的基因CpF2KP的功能,得到目的蛋白尤为重要。本研究从番木瓜基因组中提取到CpF2KP基因的编码序列(coding sequence,CDS)序列,该基因CDS全长2274 bp。将该基因CDS全长扩增之后选用pGEX-4T-1载体进行原核表达。对载体pGEX-4T-1用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切,利用基因重组的方式将扩增序列构建到原核表达载体上。经过诱导条件探索,SDS-PAGE结果显示GST-CpF2KP重组蛋白的大小约为110 kDa,诱导CpF2KP蛋白表达的最适条件为:异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度为0.5 mmol/L,温度28℃。对诱导后的CpF2KP蛋白进行纯化,得到了纯化的单一目的蛋白。此外,检测了该基因的组织表达特性发现该基因在种子中表达量最高,在果肉中表达量最低。该研究为进一步深入揭示番木瓜CpF2KP蛋白的功能及研究该基因参与的生物学过程提供了重要基础。
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| 关 键 词： | 番木瓜 CpF2KP 原核表达 蛋白纯化 |
| 收稿时间： | 2022/8/15 0:00:00 |
Cloning, expression and purification of fructose-2,6-bisphosphatase gene CpF2KP in papaya |
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| ZUO Liping,ZENG Qiuxi,ZHAO Xiaobing,YANG Liyuan,XU Liangwei,LAI Juan,YUE Jingjing.Cloning, expression and purification of fructose-2,6-bisphosphatase gene CpF2KP in papaya[J].Chinese Journal of Biotechnology,2023,39(2):614-624. |
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| Authors: | ZUO Liping ZENG Qiuxi ZHAO Xiaobing YANG Liyuan XU Liangwei LAI Juan YUE Jingjing |
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| Institution: | Genomics and Biotechnology Research Center, Fujian Agriculture and Forestry University, Fujian Province Key Laboratory of Haixia Applied Plant Systems Biology, Fuzhou 350002, Fujian, China;College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, Fujian, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | papaya CpF2KP prokaryotic expression protein purification |
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