| 核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用 |
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| 引用本文： | 崔璐瑶,李安娜,林茹,张嘉禛,施嘉诚,周勉. 核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用[J]. 微生物学报, 2023, 63(3): 1088-1098 |
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| 作者姓名： | 崔璐瑶 李安娜 林茹 张嘉禛 施嘉诚 周勉 |
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| 作者单位： | 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划（2018YFA0900300）；上海市青年科技启明星计划（19QA1402600） |
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| 摘 要： | [目的]核酸的甲基化修饰是一种常见的化学修饰形式,具有重要的生物学功能,却也在一定程度上给一些核酸研究过程带来了技术难度。tRNA上具有的大量甲基化修饰会阻碍逆转录进程,从而降低荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和高通量测序对其的检测效率。来自大肠杆菌(Escherichia coli)的AlkB蛋白是一种多功能的脱烷基化酶,可以去除DNA和RNA上多种甲基化为代表的修饰,有望解决以上问题。[方法]针对大肠杆菌来源的AlkB,分别尝试在大肠杆菌和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中进行诱导表达和纯化,对纯化获得的AlkB进行酶学性质测定。最后以tRNAUAUIle等两种tRNA为代表,研究AlkB的处理对于荧光定量PCR法检测tRNA表达水平的影响。[结果]AlkB在大肠杆菌中表达时多以包涵体形式存在,但是在毕赤酵母中可以成功分泌表达。使用镍柱分离纯化后获得了纯度高于95%的AlkB蛋白,其酶学性质参数如...
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 去甲基酶 AlkB tRNA 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2022-07-14 |
Nucleic acid demethylase AlkB in Pichia pastoris: expression, purification, and application in tRNA-related research |
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| CUI Luyao,LI Ann,LIN Ru,ZHANG Jiazhen,SHI Jiacheng,ZHOU Mian. Nucleic acid demethylase AlkB in Pichia pastoris: expression, purification, and application in tRNA-related research[J]. Acta microbiologica Sinica, 2023, 63(3): 1088-1098 |
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| Authors: | CUI Luyao LI Ann LIN Ru ZHANG Jiazhen SHI Jiacheng ZHOU Mian |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris demethylase AlkB tRNA enzyme property |
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