首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
     

核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用
引用本文:崔璐瑶,李安娜,林茹,张嘉禛,施嘉诚,周勉. 核酸去甲基酶AlkB在毕赤酵母中的表达纯化及在tRNA相关研究中的应用[J]. 微生物学报, 2023, 63(3): 1088-1098
作者姓名:崔璐瑶  李安娜  林茹  张嘉禛  施嘉诚  周勉
作者单位:华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237
基金项目:国家重点研发计划(2018YFA0900300);上海市青年科技启明星计划(19QA1402600)
摘    要:[目的]核酸的甲基化修饰是一种常见的化学修饰形式,具有重要的生物学功能,却也在一定程度上给一些核酸研究过程带来了技术难度。tRNA上具有的大量甲基化修饰会阻碍逆转录进程,从而降低荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和高通量测序对其的检测效率。来自大肠杆菌(Escherichia coli)的AlkB蛋白是一种多功能的脱烷基化酶,可以去除DNA和RNA上多种甲基化为代表的修饰,有望解决以上问题。[方法]针对大肠杆菌来源的AlkB,分别尝试在大肠杆菌和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中进行诱导表达和纯化,对纯化获得的AlkB进行酶学性质测定。最后以tRNAUAUIle等两种tRNA为代表,研究AlkB的处理对于荧光定量PCR法检测tRNA表达水平的影响。[结果]AlkB在大肠杆菌中表达时多以包涵体形式存在,但是在毕赤酵母中可以成功分泌表达。使用镍柱分离纯化后获得了纯度高于95%的AlkB蛋白,其酶学性质参数如...

关 键 词:毕赤酵母  去甲基酶  AlkB  tRNA  酶学性质
收稿时间:2022-07-14

Nucleic acid demethylase AlkB in Pichia pastoris: expression, purification, and application in tRNA-related research
CUI Luyao,LI Ann,LIN Ru,ZHANG Jiazhen,SHI Jiacheng,ZHOU Mian. Nucleic acid demethylase AlkB in Pichia pastoris: expression, purification, and application in tRNA-related research[J]. Acta microbiologica Sinica, 2023, 63(3): 1088-1098
Authors:CUI Luyao  LI Ann  LIN Ru  ZHANG Jiazhen  SHI Jiacheng  ZHOU Mian
Affiliation:State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China
Abstract:
Keywords:Pichia pastoris  demethylase  AlkB  tRNA  enzyme property
本文献已被 维普 等数据库收录!
点击此处可从《微生物学报》浏览原始摘要信息
点击此处可从《微生物学报》下载全文
设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号